Impact Des Polymorphismes Génétiques De La Glycoprotéine B De Cytomegalovirus Sur Les Résultats Chez Les Receveurs De Transplantation Solid-Organe Avec Maladie De Cytomegalovirus

Contexte On ignore si les polymorphismes viraux spécifiques affectent la réponse thérapeutique in vivo chez les patients atteints de cytomégalovirus CMV Polymorphismes dans le gène gV de la glycoprotéine B du CMV permettent la discrimination de génotypes distincts gB-gB Nous avons évalué l’influence des génotypes gB sur les résultats cliniques et virologiques du CMV L’étude VICTOR a été incluse dans cette étude. Le génotypage du CMV gB a été réalisé en utilisant une réaction en chaîne de la polymérase quantitative en temps réel au début du traitement antiviral. Résultats Parmi les patients atteints d’une maladie à CMV, la prévalence de Les types de souche gB étaient% pour gB,% pour gB,% pour gB et% pour gB, alors que les infections mixtes étaient présentes dans% Les patients séropositifs-séropositifs / receveurs-séropositifs étaient plus susceptibles d’avoir une infection gB mixte que donneur-séropositif / receveur patients séronégatifs% vs%; P & lt; Les charges virales initiales médianes étaient plus élevées et le temps d’éradication virale était plus long P = et P = respectivement pour une infection mixte versus une infection avec un seul génotype Dans un modèle multivarié, l’infection mixte gB était un prédicteur significatif de l’échec d’éradication du virus génotype unique; odds ratio,; % Intervalle de confiance, -; P = après contrôle de la charge virale initiale, du statut sérologique du CMV au départ, de la résistance au ganciclovir et du traitement antiviral. Aucun effet du génotype gB n’a été observé sur la récurrence virologique ou CMVConclusions Aucun génotype gB spécifique ne semble conférer un avantage spécifique de virulence CMV. les infections sont associées à des charges virales plus élevées et à une clairance virale retardée

Le CMV reste le pathogène viral le plus important après transplantation d’organe Le risque de développer une maladie à CMV chez les greffés d’organes dépend probablement d’une combinaison de facteurs hôtes et viraux Par exemple, le CMV séropositif est un facteur de risque important. Les autres facteurs de risque incluent le type d’organe transplanté, le rejet de greffe à court terme , et l’intensité du régime immunosuppresseur utilisé après la transplantation. Ces facteurs de risque exercent généralement leurs effets grâce à une meilleure réplication virale et de nombreuses études ont montré qu’une charge virale élevée et une exposition cumulative à la réplication virale sont des risques de développer une maladie à CMV . immunité innée dans le contrôle de l’infection à CMV chez les receveurs de greffe Cependant, on sait peu de choses sur l’influence des virus facteurs de virulence dans l’issue de l’infection par le CMV Une cible virale importante qui a été précédemment étudiée est la glycoprotéine B gB codée par le CMV UL gB a été impliquée dans plusieurs étapes essentielles de la pathogenèse du CMV, telles que l’entrée du virus, la fusion cellulaire et le De plus, la gB est impliquée dans l’activation de l’immunité innée, est un antigène majeur pour l’induction d’anticorps neutralisants et joue un rôle dans l’induction d’une réponse immunitaire à médiation cellulaire contre le CMV montré que les polymorphismes dans le gène CMV UL ou le gène gB permettent la discrimination de génotypes distincts gB-gB Les études sur les associations entre le génotype gB et le résultat ont été incohérentes, certaines études indiquant une association avec la maladie et d’autres Le but de la présente étude était d’évaluer l’influence du génotype gB sur l’évolution de la maladie à CMV chez une cohorte prospective de patients inclus dans une étude multicentrique. de l’étude VICTOR sur le traitement du CMV [Une étude sur Valcyte {Valganciclovir} comparée au Ganciclovir chez des patients atteints d’une maladie à CMV qui sont des receveurs de greffe d’organe solide]

Méthodes

Population et définitions Patients transplantés d’organes recevant un essai randomisé et contrôlé d’un traitement contre la maladie à CMV L’étude de VICTOR a été incluse dans cette étude. Les résultats de l’étude VICTOR ont été publiés ailleurs En bref, randomisé, ouvert, multicentrique ClinicalTrialsgov NCT Les receveurs de transplantation d’organes pleins adultes présentant à la fois des preuves virologiques et cliniques de la maladie à CMV étaient éligibles à l’inscription. Des critères d’inclusion et d’exclusion ont été décrits précédemment [essai de noninfériorité comparé au traitement par valganciclovir par voie intraveineuse. L’étude actuelle combinait les deux groupes de traitement ensemble et était planifiée a priori pendant la conception initiale du protocole. Un total de patients randomisés dans l’essai de traitement Parmi ceux-ci, les patients constituaient la population d’efficacité. pour jours, suivi d’une prophylaxie secondaire avec mg par jour ajusté pour la fonction rénale du valganciclovir jusqu’à ce que les charges virales CMV jour ont été déterminées chez tous les patients à jours,,,,,,,,,,, et puis mois et après randomisation et en cas de Pour cette sous-étude, le succès du traitement a été défini comme l’éradication virale le jour en utilisant une limite de charge virale de copies / ml la limite inférieure de la détection du test par l’Amplicor CMV Monitor Test La récurrence du CMV L’ADN ou la maladie clinique a été définie comme une réaction en chaîne de la polymérase positive Résultats PCR ou signes cliniques après éradication au jour La définition de la maladie à CMV suit les directives de l’American Society of Transplantation. ] génotypage gB Le génotypage de gB a été réalisé par PCR quantitative en temps réel sur des échantillons de sang total au début du traitement antiviral usi ng méthodes précédemment décrites En bref, les amorces et sondes ciblant les gènes CMB gB à gB ont été conçus avec Primer Express Applied Biosystems Mineure liaison de rainure a été utilisée pour améliorer la spécificité parce que la séquence du gène gB est conservée ADN a été extrait de μL de sang total à l’aide du mini kit sanguin Qiagen TaqMan PCR a été réalisée avec l’instrument ABI PRISM avec des conditions universelles Une courbe standard externe pour la quantification des génotypes gB a été établie avec des dilutions en série d’un fragment d’ADN d’une paire de bases du gène gB. La sensibilité de la PCR TaqMan a été comparée à un test PCR LightCycler en temps réel utilisé dans le laboratoire de diagnostic de routine avec des dilutions en série des génotypes gB à gB connus. Pour évaluer la précision du test, des réactions PCR TaqMan répétées ont été effectuées plier dilutions dans des copies de l’ADN de chaque génotype gB à gBOn la base des résultats de l’analyse pour le jour de l’échantillon de base, les patients étaient cate gorized comme ayant une infection avec gB, gB, gB ou gB ou une infection mixte Ce dernier a été défini comme une infection à CMV avec & gt; Génotype gB en un seul échantillonAnalyse statistique Compte tenu des résultats de l’étude VICTOR, qui ne présentait aucune différence entre les groupes de traitement, nous avons combiné les deux groupes pour l’analyse du rôle du génotype gB dans l’évolution de la maladie. Les variables continues ont été comparées en utilisant le test t ou le test U de Mann-Whitney dans le cas d’échantillons et l’analyse de variance -way ou le test de Kruskal-Wallis pour plusieurs échantillons. L’éradication virale a été décrite en utilisant l’analyse de survie de Kaplan-Meier groupes utilisant le test de Breslow Wilcoxon généralisé Une régression logistique multivariable ou le test de Cochran-Mantel-Haenszel pour l’égalité des odds ratios a été utilisé pour estimer l’effet du génotype gB dans un modèle univarié et multivarié en ajustant les facteurs de confusion potentiels, tels que la charge virale plasmatique mesurée par Amplicor CMV Monitor, les niveaux d’IgG à la ligne de base, le type de traitement antiviral reçu valgan le ciclovir ou le ganciclovir, et les valeurs de résistance au ganciclovir ⩽ ont été jugées statistiquement significatives

Résultats

Population de patients Parmi les patients de la population ayant présenté une maladie à CMV dans l’étude VICTOR, le génotype gB était disponible chez les patients La prévalence des types de souches gB était de% de gB,% de gB,% de gB,% de Infection mixte: gB / gB n =, gB / gB n =, gB / gB n =, gB / gB n =, gB / gB n =, gB / gB n =, génotypes n =, et tous les génotypes n = Tableau donne les caractéristiques de base des patients inclus dans l’étude Aucune différence n’a été trouvée en termes d’âge, sexe, traitement antiviral reçu, type de transplantation d’organe et état sérologique CMV entre patients selon le génotype gB Cependant, des différences significatives ont été observées dans l’incidence des infections mixtes sur la base des sérotypes donneur et receveur prétransplantation. Les patients D / R étaient plus susceptibles d’être infectés par un seul génotype, alors que les patients D / R étaient plus susceptible d’être infecté par un mélange de géno types P & lt;

Figure Vue largeDownload slideDistribution de la glycoprotéine B génotype gB chez tous les patients et patients présentant une infection mixteFigure View largeDownload slideDistribution de la glycoprotéine B génotype gB chez tous les patients et patients avec infection mixte

Table View largeTélécharger slideBaseline Caractéristiques des patients inclus dans l’étude, selon la glycoprotéine B gB GenotypeTable View largeDownload slideBaseline Caractéristiques des patients inclus dans l’étude, selon la glycoprotéine B Génotype gBCaractéristiques de la maladie à CMV selon le génotype gB Les caractéristiques cliniques et virologiques de la maladie à CMV Dans l’ensemble,% des patients avaient un syndrome viral CMV et% des patients avaient une maladie invasive tissulaire. Chez les patients, les caractéristiques de la maladie CMV n’étaient pas spécifiées Les patients avec infection mixte étaient moins susceptibles d’avoir une maladie invasive tissulaire que les patients infectés avec un seul génotype% vs%; P = Cependant, la sévérité globale de la maladie à CMV basée sur une évaluation par l’investigateur était similaire entre les groupes

Table View largeDownload slideClinical Caractéristiques de cytomégalovirus CMV maladie, selon glycoprotéine B gB GenotypeTable View largeDownload Caractéristiques cliniques de cytomégalovirus CMV maladie, selon glycoprotéine B gB génotypeGénotype et réponse à la thérapie Les charges virales de sang entier et de plasma ont été analysées et comparées entre différents types de gB Tableau Les charges virales initiales médianes dans le sang total étaient plus élevées chez les patients présentant une infection mixte versus une seule infection gB, vs, copies / mL, P =, alors que dans le plasma les charges virales élevées chez les patients avec génotypes mixtes gB étaient non significatives, vs, copies / mL ; P = Les patients infectés par le génotype gB ont une charge virale plus élevée que les autres génotypes lorsqu’ils sont mesurés dans le sang total par PCR quantitative en temps réel P = mais pas par PCR plasmique Amplicor P = La moyenne ± écart type par rapport à l’éradication virale était plus longue dans les infections mixtes que dans les infections non mélangées ± ± ± jours; P = Dans le modèle univarié, l’échec du traitement défini par un manque d’éradication virale à la journée était plus élevé chez les patients avec une infection mixte que chez les patients avec une infection avec un seul génotype% vs%; P = Dans le modèle multivarié, l’infection mixte est restée un prédicteur significatif de l’échec du rapport de cotes de la thérapie; % Intervalle de confiance, -; P = après contrôle de la charge virale initiale, du statut sérologique du CMV au départ, de la résistance au ganciclovir et du traitement antiviral. Des informations complètes sur la récurrence clinique et virologique de l’infection et de la maladie CMV étaient disponibles chez les patients. Aucun effet du génotype gB n’a été observé sur la récurrence virologique ou clinique du CMV P = pour le génotype mixte vs le génotype unique et P = parmi les différents génotypes

Discussion

R séropositif, alors que les patients D / R étaient plus susceptibles d’avoir une seule infection de génotype Ceci est cohérent avec la réactivation simultanée des souches de CMV donneur et receveur chez les patients D / R En outre, la présence d’infection mixte dans une partie de D / R – patients% suggère que & gt; le génotype peut également être transmis simultanément du donneur d’organe au receveur L’incidence plus faible de maladies invasives chez les patients présentant une infection mixte peut refléter le rôle de l’infection mixte comme marqueur de substitution chez les receveurs séropositifs, un groupe reconnu moins de maladies invasives que les patients D / R- Cependant, la charge virale était plus élevée chez les patients présentant une infection mixte. Ceci peut être dû à la difficulté du contrôle immunologique des souches virales mixtes qui peuvent nécessiter des lymphocytes T qui reconnaissent différents épitopes viraux. L’échec du traitement antiviral initialement identifié dans l’étude VICTOR incluait une charge virale de base élevée et la présence d’une phase de latence définie par l’incapacité à réduire la charge virale de ~% à la semaine . prédicteur de l’échec de la thérapie antivirale, indépendamment de la charge virale initiale, du statut sérologique du CMV et de la résistance au ganciclovir. Conclusion Les résultats d’études antérieures évaluant le rôle des génotypes de la gB dans la pathogenèse du CMV ont été incohérents. Dans une étude portant sur des receveurs de greffe d’organe, les résultats ont été plus probants. et les patients atteints de maladie hématologique , une infection mixte était associée à des charges virales de base plus élevées P & lt; et chez les receveurs de greffe, un taux plus élevé de maladie à CMV et de rejet à court terme P & lt; Conformément à nos observations, aucune différence clinique ou virologique majeure significative n’a été trouvée parmi les génotypes individuels dans cette dernière étude Dans une autre étude , il y avait une tendance à la clairance virale retardée chez les patients avec infection mixte n =, bien que la taille de l’échantillon était une petite demi-vie de charge virale de jours pour une infection mixte, comparée à des jours pour une infection avec un seul génotype; P = Prises ensemble, ces données supportent la théorie selon laquelle une infection mixte peut être plus réfractive au contrôle immunologique comparé aux infections génotypiques gB uniques Bien que la gB participe à plusieurs étapes essentielles de la pathogenèse du CMV, la raison pour laquelle les infections mixtes ont une réponse altérée le traitement reste inexpliqué L’immunité préexistante chez les patients séropositifs atteints d’une infection mixte peut seulement être spécifique de l’épitope aux souches réceptrices mais pas aux souches transmises par le donneur; Par conséquent, le récepteur séropositif agit comme immunologiquement naïf pour les souches nouvellement acquises Alternativement, le génotype gB peut être un marqueur de substitution pour un autre aspect encore identifié de la forme réplicative virale, tels que les polymorphismes dans l’ADN polymérase UL CMV. La charge virale initiale était plus élevée, mais aucune différence significative n’a été constatée entre les caractéristiques cliniques de la maladie ou la réponse au traitement antiviral parmi les génotypes individuels de gB. Cette étude présentait certaines limites. Elle représente une analyse secondaire des résultats de l’étude VICTOR. le but principal de l’étude Cependant, cette analyse secondaire a été spécifiée a priori, permettant ainsi la collecte prospective d’échantillons et de données appropriés. Bien que le grand nombre de patients étudiés nous ait permis de construire une analyse multivariée robuste, nous ne pouvons exclure que les conclusions été biaisée par la présence de variables de confusion non incluses dans modèle D’un autre côté, les points forts de l’étude incluent le grand nombre de différents receveurs de greffes d’organes inclus dans différentes parties du monde, l’utilisation d’une méthode sensible et quantitative pour détecter le génotype gB et un suivi étendu et standardisé. Pour résumer, nous avons analysé la distribution de la souche gB dans une large cohorte de patients atteints de CMV. Génotype mixte L’infection était survenue chez près de la moitié des patients et était plus probable si le donneur et le receveur étaient séropositifs. Bien qu’aucun génotype gB spécifique ne semble conférer un avantage viral viral, une infection mixte était associée à des charges virales plus élevées et à une clairance virologique retardée. Rôle potentiel des polymorphismes viraux dans l’influence de la forme virale in vivo Actuellement, il est peu probable Cependant, cette étude fournit des informations importantes sur la pathogenèse du CMV, et la nature de la réponse immunologique chez les patients atteints d’une infection à souches mixtes devrait être explorée dans de futures études.

Groupe d’étude VICTOR

Amérique du Nord Sandra CockfieldAmérique Latine Anabela Arminio, Luis FA Camargo, Valter Duro García, Carmen Gracida, Carlos Henríquez, Marilda Mazzali, Elias David Neto, José Osmar Medina Pestana et Rafael Reyes Asie, îles du Pacifique et Australie Ian Dittmer, Allan Glanville, George TJ John, Vijay Kher, RK Sharma et CM ThiagarajanEurope et Moyen-Orient José María Aguado, Emel Akoglu, Hofman Blazenka, Felix Burkhalter, Magdalena Durlik, Antonio Franco Esteve, Maciej Glyda, Abdul Hammad, Rajko Hrvacevic, Madis Ilmoja, Marian Klinger, Dirk Kuypers, Phil Mason, Miguel Montejo, Ercan Ok, Mai Ots, Patrik Peters, Rafails Rozentals, Boleslaw Rutkowski, Sabine Schmaldienst, Juerg Steiger, Zbigniew Wlodarczyk et Michael Zakliczynski

Remerciements

Nous remercions Min Cao pour son excellente assistance technique. Dr Manuel est le récipiendaire de la Transplantation Society / Roche Fellowship in Transplant Infectious Diseases, – Cette étude a été financée par une subvention sans restriction de Roche Pharmaceuticals L’étude VICTOR a été financée par Roche Pharmaceuticals. Humar, MDP, AGJ, et A Hartmann ont effectué des travaux de consultance pour F Hoffmann-La Roche AA est un ancien employé de F Hoffmann-La Roche entre et et a servi de consultant à F Hoffmann-La Roche Au cours de l’étude, AAB a été employé par Hyperphar, qui était un sous-traitant pour F Hoffmann-La Roche embauché pour effectuer la gestion des données et des analyses statistiques Tous les autres auteurs: pas de conflits