Les parechovirus humains en tant que cause virale importante de la maladie sépsislike et de la méningite chez les jeunes enfants

Contexte Entérovirus Les VE appartiennent à la famille des Picornaviridae et sont une cause bien connue de septicémie néonatale et de méningite virale. Les parechovirus humains HPeVs type 1 et 2, précédemment appelés échovirus 22 et 23, ont été associés à de légers symptômes gastro-intestinaux ou respiratoires chez les jeunes enfants. On connaît actuellement des génotypes dont HPeV3 est associé au sepsis néonatal et à la méningite Méthodes Des échantillons de liquide céphalo-rachidien d’enfants âgés de moins de 5 ans testés par PCR en chaîne par polymérase ont été sélectionnés n = 761 Echantillons de 716 de ces enfants Les données sur la présentation clinique des enfants infectés par HPeV ont été documentées rétrospectivement. Les résultats HPeV ont été trouvés dans des échantillons de liquide céphalorachidien de 33 à 46% des enfants. La prévalence annuelle de HPeV dans le liquide céphalo-rachidien variait remarquablement: 82% en 2004, 04% en 2005, et 57% en 2006 EV a été détectée dans 14% 108 des 761 échantillons, sans variation de la prévalence annuelle. Les enfants avec HPeV dans le liquide céphalo-rachidien présentaient des symptômes cliniques de septicémie et de méningite qui ont conduit à l’hospitalisation et au traitement antibiotique. Les PCR spécifiques ne détectent pas les HPeV L’ajout d’une PCR spécifique HPeV a permis une augmentation de 31% de la détection d’une cause virale de septicémie néonatale ou de symptômes du système nerveux central chez les enfants de moins de 5 ans HPeV peut être considéré comme le second. cause de la septicémie virale et la méningite chez les jeunes enfants, et l’identification rapide de HPeV par PCR pourrait contribuer à une plus courte durée de l’utilisation des deux antibiotiques et séjour hospitalier

Les VE entérovirus appartiennent à la famille des Picornaviridae et sont une cause bien connue de septicémie et de méningite chez les jeunes enfants [1, 2] Deux anciens sérotypes EV, connus sous le nom d’échovirus 22 et échovirus 23, ont été reclassés dans le nouveau genre Parechovirus du Picornaviridae comme parechovirus humain HPeV types 1 et 2 [3] De nouveaux types HPeV 3 à 6 ont récemment été identifiés au Japon, aux Pays-Bas et aux États-Unis [4-7] HPeV1 est considéré comme un pathogène largement répandu qui affecte principalement les jeunes enfants [8, 9] Les infections à HPeV1 sont le plus souvent associées à des symptômes gastro-intestinaux ou respiratoires légers. Les infections HPeV2 surviennent rarement et sont associées principalement aux symptômes gastro-intestinaux [10] HPeV3 a été associé à une maladie plus sévère, comme la septicémie néonatale et la méningite [11, 12] Des symptômes d’atteinte du SNC, comme l’encéphalite et la paralysie, ont également été rapportés pour HPeV1 [13, 14], mais ont été rapportés moins fréquemment que les infections à VE [15] ou H PeV3 [12, 16] A ce jour, pratiquement aucune donnée clinique n’est disponible sur les types 4, 5 et 6PCR de HPeV plus récemment découverts basés sur la région 5 ‘non traduite hautement conservée qui s’est révélée être une méthode rapide et sensible pour diagnostiquer L’EV en tant que cause de méningite et de sepsie [2, 17, 18] Cependant, les tests moléculaires pour diagnostiquer EV ne détecteront pas HPeV, en raison du manque de conservation de séquence entre HPeV et EV à l’extrémité 5 ‘du génome [19, 20 Par conséquent, les infections dans lesquelles HPeV provoque une maladie grave comme la méningite ou la septicémie peuvent être sous-diagnostiquées, car la culture virale du LCR est insensible et la culture d’échantillons de selles ou de prélèvements de gorge n’est souvent pas réalisée. un agent causal de la méningite virale ou la maladie sepsislike chez les enfants est inconnue Nous avons développé un test de TaqMan PCR en temps réel dirigé sur la région 5 ‘non traduite, pour détecter HPeV directement à partir d’échantillons cliniques [21] Ici, nous avons étudié rétrospectivement la prévalence de HPeV dans les échantillons de CSF d’enfants obtenus au cours de 2004-2006, et nous avons étudié les symptômes cliniques associés à la détection de HPeV dans le LCR

Méthodes

Echantillons cliniques Depuis 2004, des échantillons de LCR qui ont été référés au Laboratoire de Virologie Clinique pour le diagnostic viral ont été régulièrement conservés à -80 ° C échantillons de LCR d’enfants de moins de 5 ans préalablement testés par RT-PCR sélectionnés 840 échantillons Des échantillons complémentaires d’ADNc ADN ont été testés rétrospectivement pour des échantillons HPeV 793 obtenus à partir de 716 enfants. Extraction d’ARN Des échantillons de CSF 200 μL ont été extraits, comme décrit par Boom et al [22], avec 20 μL de particules de silice fractionnées en taille. combinaison avec 900 μL de tampon de lyse L6 Les échantillons ont été coextraits avec 6250 copies d’ARN contrôle interne blindé, correspondant à 500 copies ADNc contrôle interne en PCR [23] L’ARN a été élué dans 100 μL de tampon Tris-EDTADétection de EV par région non traduite 5 ‘RT -PCR Quarante microlitres d’ARN extraits ont été utilisés pour la transcription inverse, comme décrit ailleurs [23], avec l’utilisation d’hexamères aléatoires Roche Diagnostics Vingt-cinq microlitres de l’échantillon d’ADNc a été utilisé pour la PCR spécifique à l’EV, comme décrit par Beld et al [23] Les 25 μL restants d’ADNc ont été conservés à -80 ° CDetection de HPeV par PCR en temps réel. Cinq microlitres de la Un échantillon d’ADNc a été utilisé pour la PCR en temps réel spécifique à HPeV précédemment décrite [21] La PCR HPeV a été réalisée dans un volume de 25 μl contenant 900 nM de chaque amorce ParechoF31 et K30 [20], 200 nM du HPeV – sonde WT-MGB Applied Biosystems, 400 ng / μL du lot numéro 17H9551 de la caséine bovine; Sigma, 1 × Mastermix universel de PCR TaqMan Applied Biosystems, et 5 μL de la réaction RT La PCR a été réalisée dans un analyseur de séquence Applied Biosystems 7000, comme suit: 2 min à 50 ° C et 10 min à 95 ° C, suivis de 45 Les données sur la présentation clinique des enfants infectés par HPeV ont été collectées rétrospectivement à l’aide d’un questionnaire. L’âge du patient au moment de l’isolement du virus, du sexe, de l’hôpital ou du service hospitalier Les lettres de congé et les dossiers médicaux ont été utilisés pour documenter les données sur la présence et la durée de la fièvre,> 38 ° C, irritabilité jugée par le médecin examinateur, fièvre symptomatique ou hypothermie avec signes de circulation sanguine. et / ou un dysfonctionnement respiratoire défini par une tachycardie ou une bradycardie, une pression artérielle basse et une diminution de la saturation, des symptômes neurologiques suspectés cliniquement de méningite, d’encéphalite, de convulsions, ou de paralysie, nt déterminé dans l’échantillon obtenu par comptage des cellules de ponction lombaire, <10 cellules / mm3, niveau de protéine du LCR> 035 g / L, niveau de glucose 28-44 mmol / L, présence d’autres pathogènes microbiens dans le LCR et anomalies révélées lors du diagnostic. imagerie cérébrale En outre, symptômes d’infections respiratoires rhinorrhée, toux, tachypnée, apnée, respiration sifflante et / ou anomalies à la radiographie du thorax, et symptômes d’infections gastro-intestinales diarrhées et / ou vomissements, seuls ou associés à une distension abdominale, si la présence ou l’absence d’un symptôme spécifique n’était pas clairement mentionnée dans le dossier médical ou la lettre de congé, l’information sur les symptômes était étiquetée comme «manquante». Analyse statistique L’analyse a été effectuée à l’aide de SPSS. pour Windows, version 121 SPSS L’analyse statistique a été effectuée sur le premier échantillon disponible par enfant. Le test U de Mann-Whitney a été utilisé pour comparer la répartition par âge entre les catégories. Variables Les variables catégorielles ont été analysées par χ2 test A P valeur & lt; 05 a été considéré comme significatif

Résultats

Détection HPeV et EV dans les échantillons de LCR Au cours de la période 2004-2006, 761 enfants de moins de 5 ans ont été testés, par PCR, pour EV dans leur LCR et 108 enfants ont eu des résultats positifs. les enfants étaient toujours disponibles pour le test HPeV; 33 enfants ont eu des résultats de test positifs pour HPeV Des infections doubles n’ont pas été observées Une infection par HPeV et une infection à EV ont été observées chez de très jeunes enfants, comme présenté dans le tableau 1. Quatre-vingt-dix-sept pour cent des enfants infectés par HPeV avaient moins de 24 mois. Pour les enfants infectés par EV, 95% avaient moins de 24 mois et 50% étaient des nouveau-nés. Il n’y avait pas de différence statistique d’âge entre les enfants positifs pour HPeV ou les enfants positifs pour EV. la plupart des échantillons qui avaient été envoyés au laboratoire à 925% provenaient d’enfants de moins de 2 ans

Tableau 1View largeTélécharger slideCaractéristiques des enfants testés pour le parechovirus humain HPeV et / ou enterovirus EV infectionTable 1View largeTélécharger slideCaractéristiques des enfants testés pour le parechovirus humain HPeV et / ou enterovirus EV infectionLa majorité des enfants infectés par HPeV ou EV étaient des garçons 70% et 62%, respectivement tableau 1 Lorsque le fait que 61% des enfants testés étaient des garçons a été pris en compte, nous n’avons pas trouvé de risque plus élevé pour les garçons de devenir positifs pour HPeV ou EV OU, 09; IC de 95%, 06-13 La prévalence annuelle de l’EV dans le LCR était de 14% au cours du tableau 2 de 2004-2006 En revanche, la prévalence annuelle de HPeV dans le LCR variait considérablement HPeV a été détectée chez 82% et 57% des patients en 2004 et 2006, La Figure 1 illustre la prévalence mensuelle de HPeV et EV dans le LCR en 2004-2006. La distribution annuelle et saisonnière variait entre EV et HPeV. Des infections à EV du SNC ont été observées tout au long de l’année, mais 50% des patients ont présenté des infections à virus HPeV du système nerveux central observées au printemps, en été et à l’automne, le pic le plus élevé ayant été observé en mai 2004. 21% des patients ont été testés positifs , alors qu’aucune infection à HPeV n’a été détectée en décembre ou en janvier 2004, 2005 ou 2006 Durant la période 2004-2006, la HPeV a été détectée dans 46% des échantillons du LCR, contre 142% dans les échantillons du tableau 2.

Tableau 2Voir grandDownload slideHuman parechovirus HPeV et entérovirus EV prévalence dans CSFTable 2Voir grandDownload slideHuman parechovirus HPeV et entérovirus EV prévalence dans CSF

Figure 1View largeTélécharger la diapositive Prévalence mensuelle du parechovirus humain HPeV et entérovirus EV dans le LCR L’axe des Y montre la prévalence mensuelle comme le pourcentage de patients positifs pour HPeV éclos et EV noirFigure 1View largeDownload Prolongation mensuelle du parechovirus humain HPeV et enterovirus EV dans CSF Le Y- L’axe montre la prévalence mensuelle comme le pourcentage de patients positifs pour HPeV éclos et EV noirLe pourcentage d’enfants infectés qui ont eu infection HPeV était de 234% 33 des 141 enfants avec EV ou HPeV infection table 2 En utilisant la PCR spécifique HPeV, le le pourcentage d’enfants positifs pour l’infection a augmenté de 31%, soit 33 enfants HPeV positifs en plus des 108 enfants EV-positifs déclarés au moment de leur maladieCaractéristiques cliniques des enfants avec HPeV dans le LCR Données cliniques sur les enfants testés positifs pour HPeV dans le LCR étaient disponibles pour 29 enfants 88%; 10 filles et 19 garçons La majorité des enfants sont nés au terme de 23 enfants [79%] et étaient en bonne santé avant l’admission à l’hôpital 25 enfants [86%] Vingt 69% des 29 enfants ont été admis dans un hôpital général. 41% ont été admis à l’hôpital universitaire dont 2 ont été admis dans une unité de soins intensifs. La durée moyenne d’hospitalisation a été de 7 jours, et 82% des enfants ont reçu des antibiotiques pendant 57 jours en moyenne. % des enfants, et l’irritabilité a été décrite par le pédiatre examinateur chez 86% des enfants Quinze 54% des enfants ont montré des signes de maladie septicémique, et 6 autres enfants 21% ont reçu un diagnostic de maladie septique du pédiatre examinateur « soupçonné SLI « Mais ne répondait pas à notre définition de la maladie sepsislike Le nombre maximal de cellules dans le LCR était de 22 cellules / mm3, et des valeurs globales de glucose normales, mais des niveaux élevés de protéines ont été trouvées dans le CSF Méningite a été diagnostiquée chez 3 enfants 12% et encéphali Chez un enfant atteint de méningite sévère, l’infarctus cérébral déterminé par tomodensitométrie cérébrale n’a pas pu être expliqué par d’autres causes Chez 2 enfants, la maladie sous-jacente était la cause la plus probable des symptômes notés dans les questionnaires. Une paralysie a été notée chez un enfant, mais cet enfant a reçu un diagnostic de traumatisme neurologique après un accident. Un enfant présentant des lésions cérébrales préexistantes a développé des convulsions Chez ces enfants, les anomalies révélées par l’imagerie diagnostique ont été trouvées comme prévu, conformément à la maladie sous-jacente

Tableau 3View largeDownload slideClinical caractéristiques de 29 patients avec parechovirus humain dans CSViewable 3View largeTélécharger les caractéristiques cliniques de 29 patients avec parechovirus humain dans CSFO autres symptômes cliniques qui ont été enregistrées étaient des symptômes d’infections gastro-intestinales 39%, infections respiratoires 36% et éruption 17% septicémie bactérienne et la méningite a été exclue sur la base de résultats négatifs de culture de sang et de liquide céphalo-rachidien. Dans 1 des 2 cultures de LCR réalisées pour un enfant, Staphylococcus epidermidis a été trouvé; chez un autre enfant, la culture d’échantillons de peau était positive pour Staphylococcus aureus Aucun autre pathogène n’a été trouvé dans notre groupe d’étude

Discussion

moins fréquemment dans notre étude, ce qui est en accord avec les observations précédentes [15, 24] Les enfants atteints de HPeV dans le LCR présentaient principalement des symptômes cliniques de septicémie, accompagnés de signes d’infection respiratoire ou gastro-intestinale. La présentation clinique des enfants avec HPeV dans le LCR décrit ici ressemblait étroitement aux symptômes cliniques décrits pour l’infection EV chez les enfants rapportés ailleurs [1, 25] La durée moyenne du séjour hospitalier pour les enfants avec HPeV dans le LCR était de 1 Nous avons démontré que l’ajout de la PCR spécifique au HPeV a augmenté la détection de l’infection chez les enfants de 31% dans notre laboratoire. Il a été démontré que le diagnostic rapide de VE l’infection par PCR peut réduire le séjour à l’hôpital et la durée d’utilisation des antibiotiques [26-28]; par conséquent, l’ajout d’une PCR spécifique HPeV pourrait réduire davantage la durée d’utilisation des antibiotiques et la durée du séjour hospitalier chez les enfants atteints de septicémie ou de symptômes du SNC. Cependant, d’autres études sont nécessaires pour déterminer l’effet du diagnostic viral rapide sur la réduction du séjour hospitalier. réduction de l’utilisation des antibiotiques Seuls quelques rapports ont été publiés sur l’épidémiologie des HPeV, tous basés sur la détection de HPeV par culture cellulaire. Les infections à HPeV sont largement répandues, affectant principalement les enfants [7-10, 16, 29] Pour HPeV1 , il a été montré qu’une minorité de patients montrent des signes d’atteinte du SNC [9, 15]. Des études récentes sur HPeV3 montrent une association avec une maladie plus grave que l’infection par HPeV1, à savoir septicémie néonatale, méningite et paralysie [4, 7, 12, 16] Dans notre étude, HPeV n’a pas été isolé par culture cellulaire; elle a été détectée directement à partir d’échantillons de LCR par PCR en temps réel grâce à l’utilisation d’amorces et de sondes validées pour les 6 génotypes connus [21] Auparavant, 1 autre étude détectait HPeV directement à partir d’échantillons de LCR par PCR en temps réel. les échantillons étaient positifs pour HPeV [24] Dans cette étude, les échantillons de LCR qui étaient négatifs pour la PCR méningococcique ou étaient négatifs en culture cellulaire mais qui étaient suspectés d’être positifs pour la méningite virale ont été sélectionnés sans restriction d’âge, diminuant la , Corless et al [24] ont peut-être manqué des HPeV, parce que la sonde de leur PCR en temps réel, décrite en 2002, montre des discordances avec les nouveaux types HPeV 3-6We qui montrent que la prévalence annuelle de HPeV dans le LCR varie remarquablement, Contrairement à EV, pour lequel la prévalence annuelle dans le LCR était stable entre 2004 et 2006, la différence de prévalence annuelle de HPeV pourrait être imputable à l’absence de circulation de HPeV au cours de l’année 2005. Cependant, nous ne pouvons exclure Les deux possibilités semblent peu probables, car HPeV a pu être détecté dans des échantillons de fèces à partir de 2005 [30] Cependant, différents génotypes de HPeV pourraient circuler dans différentes années. ou saisons, comme cela a été suggéré ailleurs [7, 10, 12, 29] Ainsi, on pourrait s’attendre à ce que les types de HPeV capables d’infecter le SNC – vraisemblablement HPeV3 – ne circulent que dans des années spécifiques Que les HPeV trouvées dans le CSF soient prédominantes HPeV3 doit encore être élucidé Le génotypage de HPeV peut se faire par séquençage du gène VP1 [6, 12], mais cela a été fait uniquement sur des isolats HPeV obtenus à partir de cultures cellulaires. La combinaison de petits volumes de CSF obtenus chez de jeunes enfants et insensibilité de la technique a limité la possibilité de génotypage dans notre étudeIl y a d’autres limites potentielles à notre étude Premièrement, la sélection des échantillons n’est pas aléatoire, mais biaisée, d’une population pédiatrique re Pour éviter ce biais, nous avons comparé la prévalence de HPeV à celle de EV, la cause virale la plus importante du sepsis néonatal et de la méningite. Un autre biais potentiel est l’incapacité à tester 45 de nos échantillons pour HPeV 29 EV positif et 16 EV négatif échantillons L’exclusion de ces échantillons de l’analyse sous-estimerait donc la prévalence EV Si les 29 échantillons EV-positifs étaient considérés comme HPeV négatifs, la prévalence HPeV dans le groupe d’étude total varierait entre 43% si tous les 16 échantillons EV-négatifs étaient HPeV Par conséquent, la prévalence de HPeV de 46% pourrait être une légère surestimation ou sous-estimation de la prévalence réelle dans notre groupe d’étude. Malgré ces limites, nous concluons que HPeV est une autre cause importante de la septicémie virale et de la méningite chez les jeunes enfants, qui a souvent été détectée par PCR, ainsi qu’une méthode de typage moléculaire sensible, élucideront davantage l’épidémiologie de HPeV rel Les PCR spécifiques à HPeV doivent être incluses dans les tests de diagnostic viral pour les échantillons de LCR et doivent être évaluées pour être utilisées dans d’autres échantillons cliniques, tels que le sang, les prélèvements de gorge et les fèces.

Remerciements

Soutien financier Département de microbiologie médicale, Academic Medical Center, Amsterdam, Pays-BasPerspectives d’intérêts potentielles Tous les auteurs: pas de conflits